104 231

Cited 0 times in

Upstream conserved sequence element that regulates TIM-3 induction in CD4+ T cell

Other Title
CD4+ T 세포에서 TIM-3 발현 유도에 관여하는 TIM-3 5' 말단의 종간 상동 염기서열
Authors
Komori, Kuniharu
Degree
Master (2013)
Abstract
The T cell immunoglobulin domain and mucin domain-3 (TIM-3)는 Th1의 세포표면에서 처음 발견되었고, T 세포의 면역반응을 억제하는 조절인자로 알려져 왔다. 하지만 TIM-3의 발현 조절 기작에 대해서는 알려져 있지 않다. 본 연구에서는 CD4+ T 세포에서 TIM-3 유전자 발현을 조절하는 enhancer를 조사하기 위해 먼저 TIM-3를 발현한다고 알려진 사람, 생쥐 그리고 소에서 TIM-3 유전자의 5' upstream 부분 (-70 Kb)의 염기서열을 분석하여 상동성이 80% 이상인 네 군데의 CNS -29 (-29602 bp ∼ -30324 bp), CNS -53 (-53882 bp ∼ -53934 bp), CNS -56 (-56508 bp ∼ -57191 bp) 그리고 CNS -63 (-63360 bp ∼ -63467 bp) 부분을 확인하였다. 그리고 Jurkat T 세포에서 TIM-3의 발현을 유도하는 phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)와 ionomycin 자극으로 인한 T 세포의 활성화에 따른 히스톤 메틸화 상태와 정상 세포에서 TIM-3 발현 유무에 따른 히스톤 메틸화 상태를 ChIP assay를 통해 분석하였다. CNS -63에서 H3K4 dimethylation (전사활성에 관여)이 관찰 되었고, H3K9 trimethylation (전사 억제에 관여)의 변화는 관찰되지 않았다. CNS -63의 enhancer activity를 luciferase reporter assay를 통해 분석하였다. T3U290 (CNS -63)에 의한 luciferase 활성이 T3U(290)과 자극이 없을 때 유사하게 나타났으며 PMA와 ionomycin에 의한 자극이 있을 때 luciferase 활성이 1.45배 증가하였다. CNS -63의 NF-κB 결합 예상 부위를 변이 시킨 T3U290 (Mut 2)에 의한 luciferase 활성이 PMA와 ionomycin에 의한 자극이 있을 때 T3U290 (CNS -63)보다 감소하였다. 이러한 결과로 보았을 때 CNS -63이 활성 자극에 의한 CD4+ T 세포에서 TIM-3 발현 증가에 관련 될 것이고 본 연구의 결과는 TIM-3 발현 조절을 이해하는데 중요한 기초를 제공할 것이다.

The T cell immunoglobulin domain and mucin domain-3 (TIM-3) was discovered in Th1 and has been known as a T cell regulatory molecule. TIM-3 expression is induced by T cell activation through mechanism not yet well-investigated. In the study, I wanted to find DNA region involved in regulation of TIM-3 transcription in human CD4+ T cells between -70 kbp to -1 bp from the TIM-3 transcription start site. Given that regulatory DNA regions show nucleotide sequence homology between species, four conserved non-coding sequences (CNS -29, CNS -53, CNS -56 and CNS -63) were analyzed by comparison human TIM-3 upstream DNA sequences with mouse and cow counterparts. Only at CNS -63, H3K4 dimethylation that is associated with transcriptional activation was observed in Jurkat T cells and CD4+ T cells isolated from human blood. Further, CNS -63 increased luciferase reporter gene expression downstream of TIM-3 minimal promoter. Enhancer activity of CNS -63 was abrogated by mutation of putative NF-κB binding sites between -63423 and -63433. These results indicate that TIM-3 CNS -63 may regulate TIM-3 transcription in human CD4+ T cells.
Keywords
TIM-3Histone H3 methylatioTranscriptionregulatio
Appears in Collections:
Theses > Graduate School of Biomedical Sciences > Master
AJOU Authors
Komori, Kuniharu
Full Text Link
Files in This Item:
13572.pdfDownload
Export
RIS (EndNote)
XLS (Excel)
XML

qrcode

해당 아이템을 이메일로 공유하기 원하시면 인증을 거치시기 바랍니다.

Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.

Browse