2026-09-23T17:11:04Zhttps://repository.ajou.ac.kr/oai/requestoai:repository.ajou.ac.kr:201003/108512024-10-11T02:21:21Zcom_201003_14372com_201003_14368col_201003_14373
Generation of chickenized 3D8 scFv antibody from mouse monoclonal anti-DNA antibody by CDRs-grafting
마우스 유래 항-DNA 단클론 항체로 부터 CDR-이식방법을 통한 닭화 3D8 scFv 항체 제조
노, 주호
권, 명희
대학원 의생명과학과
201224127
노, 주호
마우스 3D8 scFv
항-핵산 항체
CDR-이식
닭화 (chickenized)
3D8 scFv
anti nucleic acid antibody
DNA/RNA hydrolyzing activity
chickenization
CDR-grafting
Immunogenicity
3D8 single chain variable fragment (scFv) derived from a MRL-lpr/lpr mouse is a catalyric anti nucleic acid antibody that has ability of cellular internalization and DNA/RNA-hydrolyzing activity. It has been reported that cells treated with 3D8 scFv protein showed the down-regulation against replication of RNA-genomed viruses and this anti-viral activity should be due to the cellular internalizaing and DNA/RNA- hydrolyzing activities of 3D8 scFv. To extend the possible applications of anti-viral activity of 3D8 scFv, we have developed a chickenized antibody of 3D8 scFv by CDRs (complementarity-derermining regions) grafting. A chickenized 3D8 scFv variant (CK) was generated by transferring six CDRs of 3D8 scFv between FRs (framework regions) of a chicken antibody which reveals high solubility and expression level in bacterial culture. CK6 of chickenized 3D8 scFv variant (CK1~7) retained the DNA-binding, DNA-hydrolysis, and cellular internalizing activities similar to that of the original mouse 3D8 scFv (m3D8). Our results demonstrate that chckenized 3D8 scFv can be generated by grafting CDRs.
자가면역 마우스 (MRL-lpr/lpr)에서 유래한 3D8 단일가닥 가변부위(single-chain variable fragment: scFv)는 세포 내 침투능력과 DNA/RNA 가수분해능력을 가진 촉매성 항-핵산 항체이다. 이전 연구에서 마우스 3D8 scFv를 세포에 처리하고 RNA-게놈 바이러스를 감염시켰을 때 바이러스의 복제가 억제되는 것이 관찰 되었다. 이러한 항-바이러스 활성은 마우스 3D8 scFv의 가수분해능력 때문으로 알려져 있다. 마우스 3D8 scFv의 항-바이러스 활성을 닭에게 적용하기 위해 본 연구에서는 CDR(complementarity-determining regions)-이식 전략을 이용하여 닭화 3D8 scFv 항체(chickenized 3D8 scFv antibody)를 제작하고자하였다. 이를 위하여 수용성이 높다고 알려진 닭 항체 뼈대 (Framework regions, FRs)에 마우스 3D8 scFv의 6개 CDRs을 옮김으로써 7가지 닭화 3D8 scFv(CK1-7)를 구축하였다. 이들 닭화 3D8 scFv 단백질을 대장균에서 발현 및 정제하여, 기존 마우스 3D8 scFv의 DNA-결합능력과 DNA-가수분해능력 및 세포 내 침투능력을 유지하는지 조사하였다. 그 결과 닭화 3D8 scFv항체 중 하나인 CK6가 마우스 3D8 scFv의 모든 활성을 동일하게 유지하는 것을 관찰하였다. 본 연구는 3D8의 본래 활성을 그대로 유지하면서 닭에게 적용할 수 있는 새로운 닭화 항체 제조의 가능성을 제시한다.
국문요약ⅰ
차례ⅱ
그림 차례ⅳ
표 차례ⅵ
Ⅰ. 서론1
Ⅱ. 재료 및 방법6
A. 대장균에서 닭화 3D8 scFv 항체 발현 및 정제6
B. 전기영동법 (SDS-PAGE) 시행
C. 면역효소흡착법 (ELISA)7
D. 공초점 현미경 분석7
E. 유세포 분석(flow cytrometry)
F. FRET-based DNA-hydrolysis assay9
G. 면역원성 (immunogenicity)조사
1. m3D8 scFv와 닭화 3D8 scFv의 면역 및 채혈9
2. protein A tag을 제거한 3D8 scFv와 CK6 정제10
3. 혈청에서 면역원성 분석을 위한 ELISA11
Ⅲ. 결과13
A. 닭화 3D8 scFv 발현벡터 제작13
B. 박테리아에서 닭화 3D8 scFv 항체의 발현 및 정제16
C. 닭화 3D8 scFv의 DNA 결합 능력 확인18
D. 닭화 3D8 scFv의 세포 내 유입능력20
E. 닭화 3D8 scFv의 핵산가수분해 능력23
F. 닭화 3D8 scFv의 특징 요약23
G. 닭화 3D8 scFv의 면역원성26
Ⅳ. 고찰32
Ⅴ. 결론34
참고문헌35
Abstract40
Master
2014-11-10T01:32:10Z
2014-11-10T01:32:10Z
2014
2014
Thesis
Theses
http://repository.ajou.ac.kr/handle/201003/10851
http://dcoll.ajou.ac.kr:9080/dcollection/jsp/common/DcLoOrgPer.jsp?sItemId=000000016301
000000016301
ko
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