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Screening for kinases regulating subcellular localization of clock proteins using human kinome library 생체시계 단백질의 세포 내 위치를 조절하는 인산화 효소 발굴 박, 나영 김, 은영 대학원 의생명과학과 201324126 박, 나영 국문 요약 ⅰ 차례 ⅳ 그림 차례 ⅶ 표 차례 ⅸ Ⅰ. 서론 1 A. 생체시계의 분자 생물학적 기전 1 B. 인산화에 의한 생체시계 조절 2 C. 핵 이동 5 D. 연구의 필요성 5 Ⅱ. 재료 및 방법 6 A. Plasmids and cloning 6 B. Establishment of human kinome expression library 9 C. Cell culture and transfection 9 D. Fluorescence microscopy 11 E. Quantitative real-time RT-PCR 12 F. Cell lysis 2 G. Western blotting 13 H. Immunoprecipitation (IP) and λphosphatase treatment 14 I. Fly genetics 15 J. Locomotor activity assays 16 Ⅲ. 결과 17 A. 인간 인산화 효소 라이브러리 구축 17 B. 인간 인산화 효소 스크리닝 20 C. VRK3 27 1. hVRK3는 mCRY1/2, mPER2, BMAL1 단백질의 세포 내 위치를 조절한다 27 2. hVRK1과 hVRK2는 mCRY1의 세포 내 위치를 바꾸지 않는다 30 3. hVRK3는 mSTAT3의 세포 내 위치에는 영향을 미치지 않는다 32 4. hVRK3는 핵 안에서 작용하여 생체시계 단백질 -mCRY1, mPER2, BMAL1- 을 세포질에 머물게 한다 34 D. PRKRA 38 1. hPRKRA는 mPER2 특이적으로 세포 내 위치를 변화시키고, mCRY1과 mPER2, BMAL1의 양을 증가시킨다 38 2. mPER2와 hPRKRA는 결합하며 hPRKRA는 mPER2 단백질의 인산화를 증가시킨다 41 3. CG6866 -prkra Drosophila homolog- knockdown 초파리는 rhythmicity가 낮다 43 E. UCKL1, NEK2, CKMT1B, ETNK1, MST1R 46 Ⅳ. 고찰 49 Ⅴ. 결론 53 참고문헌 55 ABSTRACT 59 Master 2015-10-28 2015-10-28 2015 2015 Thesis Theses http://repository.ajou.ac.kr/handle/201003/11828 http://dcoll.ajou.ac.kr:9080/dcollection/jsp/common/DcLoOrgPer.jsp?sItemId=000000019530 000000019530 ko application/pdf