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Roles of AMPK in Drosophila circadian clock 초파리 생체시계에서 AMPK의 역할 정, 재원 김, 은영 대학원 의생명과학과 201225148 정, 재원 circadian clock AMPK 국문요약 ⅰ 차례 ⅳ 그림 차례 ⅵ 표 차례 ⅶ Ⅰ. 서론 1 Ⅱ. 재료 및 방법 5 A. Schneider 2 (S2) 세포에서 발현시키기 위한 plasmid 5 B. S2 세포의 배양과 transfection 6 C. 형질전환 초파리 6 D. Locomotor Activity Monitoring System 8 E. 초파리 entrainment와 수확 8 F. 단백질액 추출 (lysis) 9 1. S2 세포에서 단백질액 추출 9 2. 초파리 머리에서 단백질액 추출 9 G. Immunoblotting (western blotting) 10 H. 면역침강법 (ImmunoPrecipitation; IP) 12 1. AMPKγ 와 dCLK 또는 dCLKΔ657-707 간의 상호작용 확인 12 2. dCLK과 AMPK α, β, γ subuit 간의 상호작용 확인 13 I. Tandem affinity purification (TAP) 15 J. 면역조직화학 (Immunohistochemistry) 16 Ⅲ. 결과 18 A. S2 세포에서 dCLK은 AMPK와 결합한다. 18 B. tim 발현 세포에서 AMPK의 발현이 저하된 초파리의 생체리듬 분석 21 C. AMPKα와 γ KD 초파리에서 AMPKα 단백질의 양이 감소하였다. 24 D. AICAR를 처리한 S2 세포에서 western blotting으로 본 dCLK은 시간에 따라 mobility가 증가한다. 26 E. AMPK KD 초파리 머리에서 얻은 단백질액의 dCLK과 PER 양상에서는 유의미한 차이가 발견되지 않았다. 28 F. AMPKγ KD 초파리의 LNvs, LNds, DNs에서 PER의 양이 감소한다. 30 G. AMPKγ 초파리에서 s-LNvs의 neural projection이 보이지 않는다. 32 H. pdf 발현세포에서 AMPK의 발현이 저하된 초파리의 생체리듬 분석. 34 I. tim 발현 세포에서 성체에서만 AMPK의 발현을 저하시킨 초파리의 생체리듬 분석. 40 Ⅳ. 고찰 33 Ⅴ. 결론 47 참고문헌 49 ABSTRACT 54 Master 2015-10-28 2015-10-28 2015 2015 Thesis Theses http://repository.ajou.ac.kr/handle/201003/11829 http://dcoll.ajou.ac.kr:9080/dcollection/jsp/common/DcLoOrgPer.jsp?sItemId=000000019513 000000019513 ko application/pdf